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嘔吐毒素免疫親和柱操作說明書
【概要】
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol， DON) 又稱嘔吐毒素(vomitoxin)，主要是由鐮刀菌的某些種產生的化學結構和生物活性相似的有毒代謝產物——單端孢霉烯族化合物中的一種。廣泛存在于全球，主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物，也污染糧食制品，人和動物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產生廣泛的毒性效應。DON最明顯的毒性作用是引起嘔吐、腹瀉、腹痛等癥，并延緩生長、降低免疫機能，與貧血、免疫抑制、食管癌、克山病也具有密切聯系。給人、家畜的健康造成巨大威脅。
【適用范圍及性能】
用于定性、定量檢測谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇時的樣品前處理。
柱容量：≥500ng
回收率：≥80%
【試驗原理】
本產品的測定的基礎是抗原抗體反應，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單克隆抗體連接在柱內凝膠上，樣品中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇經過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和層析柱，在免疫親和柱內，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇與抗體結合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他物質。用甲醇洗脫脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，然后注入到分析儀器中用于檢測。
【包裝組成】
根據不同規格，每一個盒中包含5/25支脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和層析柱及1份說明書。
【需要而未提供的設備及試劑】
設備：
┅┅高速均質器或組織勻漿機
┅┅粉碎機
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移液器：單道 100μl～1000μl
┅┅槽紋濾紙（折疊快速定性或定量濾紙）
┅┅玻璃微纖維濾紙（1.5μm孔徑）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等）
試劑：
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅聚乙二醇（PEG）2000
┅┅色譜級甲醇
┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液（PBS）：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調節pH值至7.0，最后用純水稀釋至1000mL
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及其制品和飼料（稀釋倍數4）
┅┅稱取25g粉碎的樣品，加入10g聚乙二醇8000后，用去離子水定容；
┅┅轉移至均質杯中，均質器高速均質2分鐘；
┅┅4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾，取上清液，使用玻璃纖維濾紙過濾后待用；
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取2mL上述樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅以5.0mLPBS溶液和去離子水快速淋洗柱子1次，流速為2-3滴/秒。棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
（二）酒類（稀釋倍數0.5）
┅┅取脫氣酒類試樣(含二氧化碳的酒類樣品使用前先置于4℃冰箱冷藏30min，過濾或超聲脫氣)或其他不含二氧化碳的
酒類試樣20g(精確到0.01g)，加人1g聚乙二醇(4.3)，用水定容至25.0mL，混勻。
┅┅用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取2mL上述樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅以5.0mLPBS溶液和去離子水快速淋洗柱子1次，流速為2-3滴/秒。棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
【結果判定】
經免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶聯免疫試劑盒進行檢測。也可氮氣吹干后，復溶以提升濃度（稀釋倍數相應變化）。
【注意事項】
┅┅嘔吐毒素危害很大，應戴手套操作。
┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：親和柱可于常溫保存，2-8℃儲存可延長有效期，不可凍存
保存期：該產品有效期為12個月。
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